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斐林试剂和班氏糖鉴定试剂

加入收藏〗 发布时间:2012-08-29

  王玉龙斐林试剂和班氏糖鉴定试剂(简称班氏试剂)都是可溶性还原糖的常用检测试剂。由于在现行的高中生物教材(必修和选修)和一些教辅资料中斐林试剂和班氏试剂交叉使用,但却没有解释二者的区别,致使许多师生为此而产生疑问。所以,我们有必要对这两种试剂的配制方法、反应原理、保存及使用方法、实验现象和结果进行对比,并作一解释。
  两种试剂的配制、使用和保存方法有区别斐林试剂:两个组成部分分别称甲液(0.19/h〕LNaOH)和乙液(0.059/l11LCu以)4),使用前将等量的甲、乙液充分混合均匀后加人待测液。
  斐林试剂甲液和乙液混合后强烈反应产生Cu(OH)2,Cu(OH)2很容易析出沉淀。因此,在使用前将甲液和乙液分开保存,现用现配。
  班氏试剂:①将86.59柠檬酸钠和509无水碳酸钠溶解在400IllL水中;②将8.659硫酸铜加人50mL水中,加热溶解;③待两者冷却至室温,将硫酸铜溶液慢慢倒人前液,同时搅匀(如产生沉淀可滤去),并补足水量至500mL备用。
  班氏试剂中的柠檬酸钠/碳酸钠是一对缓冲物质,把硫酸铜溶液倒入到碳酸钠溶液中时,形成了一种可溶性的又能解离出C了+的络盐。即在柠檬酸钠/碳酸钠中,OH一有限(碱性弱),产生的cu(OH)2少,不易析出沉淀。柠檬酸是CuZ十形成亲水性掩蔽络合物的络合剂。
  两种试剂鉴定反应的原理相似实际上班氏试剂只不过是斐林试剂的改良,其碱性弱,试剂稳定,干扰因素少,灵敏度高,优于斐林试剂。
  斐林试剂中有蓝色的Cu(OH):沉淀,Cu(Orl)2加人到待测材料中,若材料中有还原性糖,在加热条件下Cu(()H)2被还原性糖的醛基还原而生成砖红色的Cu20沉淀,还原性糖本身被氧化。
  如斐林试剂鉴定葡萄糖存在的反应式:溶液颜色变化:浅蓝色一棕色一砖红色(沉淀)用班氏试剂鉴定生物组织中还原性糖的存在,其原理与上述斐林试剂的鉴定反应相似,斐林试剂鉴定是出现明显的砖红色(沉淀),班氏试剂鉴定会形成红色至黄色不同的颜色,或出现红黄色,即有还原性糖的存在,这是因为不同生物组织中还原性糖的含量不同。
  用班氏试剂测定还原性糖时,还原性糖在这种碱性溶液中能将CuZ十还原为Cu十,即砖红色的氧化亚铜沉淀。
  班氏试剂化学性质稳定,配制后能长期使用,多用于尿糖的测定,也可用于生物组织或其他实验中可溶性还原糖的鉴定。
  要注意的是斐林试剂的甲、乙液,必须先混合均匀后再用,如果分别把Na(卫通和O」玉溶液加人到含有还原性糖的组织提取液中,其中的有机酸会与Na(}1迅速反应,使反应物中没有Cu((注)2或者Cu((工王)2量不足,从而使还原性糖与Cu(OH)2的反应不能进行或现象不明显,影响还原性糖的鉴定。
  使用班氏试剂做尿糖鉴定实验使用班氏试剂做尿糖鉴定实验时,取1mL班氏试剂加人试管,加人糖尿病患者的尿液0.1mL(即班氏试剂和尿液的体积比是10:1),混合均匀后水浴加热。若尿液中有一定数量的葡萄糖,则可观察到溶液开始为蓝色,后来出现黄绿色、土黄色或砖红色沉淀。 

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